EGFR-Diagnostik allgemein

EGFR ist ein Transmembranrezeptor, dessen Aktivierung wesentliche Signalwege steuert, die Zellproliferation, Überleben und Differenzierung beeinflussen. Mutationen im EGFR-Gen können zur konstitutiven Aktivierung des Rezeptors führen und sind therapeutisch bedeutsam.^1–3

Die Bestimmung des EGFR-Mutationsstatus dient beispielsweise beim nicht-kleinzelligen Lungenkarzinom (NSCLC) primär dazu, Patient:innen zu identifizieren, die für eine zielgerichtete Therapie mit einem EGFR-Tyrosinkinase-Inhibitor (TKI) in Frage kommen. Zudem kann das Testen auch bei Progression unter TKI-Therapie zur Detektion von Resistenzmutationen wie T790M eingesetzt werden.^2,4

Für die molekulare Testung werden in der Regel formalinfixierte, paraffineingebettete (FFPE) Gewebeproben bevorzugt, aber auch frische, gefrorene oder alkohol-fixierte Gewebeproben sind geeignet. Zytologische Proben (z. B. Zellblöcke) können ebenfalls genutzt werden, wobei eine ausreichende Tumorzellanzahl und -qualität für valide Ergebnisse entscheidend ist.^5,6
Auch Blutproben können im Fall von unzureichendem Gewebematerial zur Analyse mittels Liquid Biopsy herangezogen werden.^7,8 Hierfür ist in der Regel ein Volumen von 5–10 ml erforderlich, um zirkulierende Tumor-DNA (ctDNA) zuverlässig nachweisen zu können.

Ein ausreichender Anteil an Tumorzellen im Untersuchungsmaterial ist entscheidend, um Mutationen mit hoher Sensitivität nachweisen zu können. Für Einzelgen-Analysen des EGFR-Status wird in der Regel ein Tumorzellgehalt von mindestens 10 % gefordert.⁹ Moderne Verfahren ermöglichen jedoch auch den Nachweis von Mutationen bei geringerem Tumorzellanteil (< 10 %).^5,6 Bei zytologischen Proben gilt zusätzlich eine absolute Tumorzellzahl von etwa 100–300 Zellen als erforderlich, um verlässliche Ergebnisse zu erzielen.¹⁰

Die gebräuchlichsten Verfahren sind Next-Generation-Sequencing (NGS), PCR-basierte Methoden (z. B. Real-Time PCR, digitale PCR) und – eher selten – die Sanger-Sequenzierung. NGS bietet eine hohe Sensitivität und ermöglicht gleichzeitig die Untersuchung auf mehrere, auch unbekannte molekulare Marker.⁹

Beim NSCLC werden immunhistochemische Methoden zur Bestimmung der EGFR-Überexpression sowie FISH für die EGFR-Kopienzahl ausdrücklich nicht empfohlen.⁶
Die eingesetzten Antikörper in der IHC zeigten keine ausreichende Sensitivität gegenüber unterschiedlichen EGFR-Mutationen und erlauben daher keine verlässliche Aussage über das Vorliegen einer therapierelevanten Mutation.¹¹

Bei anderen Tumorentitäten wie dem kutanen Plattenepithelkarzinom oder dem Glioblastom können hingegen ISH- bzw. FISH-basierte Verfahren zur EGFR-Diagnostik sinnvoll eingesetzt werden.¹²

Vor dem Hintergrund der Limitationen einzelner Methoden (Sensitivität, Probenqualität, Probenmaterialverfügbarkeit) kann eine Absicherung durch zwei verschiedene Nachweisverfahren (Two-Tier-Ansatz) sinnvoll sein.¹³